本文標題："用于顯微鏡下所觀察莢膜染色法方法的操作流程"
發布者：yiyi ------ 分類: 行業動態 ------
人瀏覽過-----時間：2012-12-11 18:33:26
莢膜染色法
目的
原理
材料與儀器
步驟與方法
實驗注意事項
實驗結果
目的
莢膜為細菌所分泌帶有黏性之物質，主要附著于細菌之細胞壁并圍繞于菌體周圍，但并非所有的細菌均可產生莢膜。具有莢膜之細菌，
于宿主體內具有可保護吞噬作用，故含有厚層莢膜之細菌被視為具有毒力且易引起疾病。以化學組成而言，莢膜物質大多為多醣類、醣蛋白或聚勝肽，另外，
莢膜系可溶性物質，故可因激烈沖洗而流失或脫離，因此莢膜染色法較其他各種鑑別染色法更為困難。本實驗旨在讓學生瞭解莢膜染色之原理并學習細菌的莢膜染色法，以明白菌體之構形。
原理
由于莢膜與染料間的親合力弱，不易著色。通常會采用負染色法即讓菌體和背景著色，而莢膜不染色，而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。
由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變化。
材料與儀器
菌種
試劑
設備儀器及其他用具
菌種
培養3~5天之芽胞桿菌（此菌若以甘露醇做碳源之培養基上培養時，芽膜則較厚）。
試劑
1%結晶紫
6%葡萄糖液
墨汁
甲醇
設備儀器及其他用具
酒精燈（或本生燈）
接種環（或接種針）
染色架
濾紙
拭鏡紙
玻片
步驟與方法
染色方法之操作流程如下：
制備菌液：先滴入l滴6%葡萄糖液于載玻片一端，接著挑取少量芽胞桿菌菌液與其充分混合，再加入1滴墨水，將三者充分混勻后即為實驗用菌液。
制作玻片標本：以左手執玻片，右手另拿一邊緣光滑的載玻片，將載玻片的一邊與菌液接觸，使菌液沿玻片接觸處散開，然后以30度角迅速且均勻地將菌液拉向玻片的一端，使菌液呈現薄膜狀態。
乾燥：置于空氣中使其自然乾燥。
固定：以甲醇浸濕玻片，固定1分鐘后將玻片取出并將甲醇倒掉。
染色：將制備完成后之玻片標本置于染色架上，接著滴上結晶紫，以結晶紫染色1~2分鐘。
水洗：染色后，將玻片之染色涂抹面向下，以自來水輕洗，直到沖洗出之液體透明無色為止。
乾燥：將玻片上多馀的水分輕輕甩乾，并可利用濾紙將水分吸乾，接著置于無菌操作臺內使其自然風乾備用。
顯微鏡觀察：以顯微鏡進行菌體之觀察（可先以低倍找出菌體后，再以高倍觀察）。
實驗注意事項
加蓋玻片時，注意不可有氣泡產生，否則會影響觀察。
制作玻片標本時，儘可能的要讓菌液均勻分布并且不可太厚，否則將影響染色。
乾燥時，不可放于火焰下乾燥。若要放于火焰下乾燥，則需放于火焰較高處進行，不可使玻片發熱為原則。
實驗結果
請畫出于顯微鏡下所觀察到之菌體鏡象，并注明各部位的名稱。
預期結果：背景灰色，菌體呈現紫色，莢膜則呈現一清晰的透明圈。
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