本文標題："光學顯微鏡觀察辨別其菌體型態-染色方法之操作流程"
發布者：yiyi ------ 分類: 行業動態 ------
人瀏覽過-----時間：2012-12-12 5:23:59
此染色方法之操作流程如下：
玻片涂抹：取出載玻片，通過酒精燈之火焰，以乳頭滴管吸取蒸餾水滴1~2滴于玻片上，并將已滅菌冷卻后的接種環沾取上述兩種樣本菌，將菌體與玻片上之無菌水相互混合均勻至混濁。
乾燥：將玻片置于無菌操作臺內自然風乾。
固定：將風乾后的玻片涂抹面向上，并迅速來回通過酒精燈上之火焰2~3次，以使菌體牢固的固定于玻片上后備用。
染色：革蘭氏染色法有以下4染色步驟：
初染：將制備好之玻片樣本置于染色架上，以1~2滴結晶紫染液染1分鐘，之后將染色涂抹面向下，以蒸餾水緩慢沖洗掉多馀的染液（圖4-2）。
媒染：將玻片上多馀的水分輕輕甩乾，并以濾紙吸乾水分，再加入碘液，靜置1分鐘后，將染色涂抹面向下，以蒸餾水緩慢沖洗掉多馀的碘液（圖4-3）。
脫色：將玻片上多馀的水分輕輕甩乾，并以濾紙吸乾水分，接著以95%之酒精進行清洗脫色，直至沖洗液之顏色由紫色轉變至無色為止，然后再一次進行水洗（圖4-4）。此步驟為關鍵步驟，易影響實驗的結果。
當觀察到沖洗液的顏色變為無色時即須立刻停止沖洗脫色（切勿脫色過度），由于脫色時間的長短受到多項因素之影響，故脫色時間的控制，需以人為的方式小心的進行。
復染：將玻片上多馀的水分輕輕甩乾，并以濾紙吸乾水分，然后滴數滴沙黃染液于玻片上靜置一分鐘，之后進行最后一次水洗（圖4-5）。
光學顯微鏡觀察辨別其菌體型態：將玻片上之水分以濾紙吸乾，以光學顯微鏡進行鏡檢，并加以記錄顏色辨別菌體為革蘭氏陰性菌（粉紅色）或是革蘭氏陽性菌（藍紫色）。
實驗注意事項
革蘭氏染色過程需進行三次染色及一次脫色步驟，每個步驟如稍有疏忽，皆可能會影響最終之實驗結果，因此在實驗過程中應謹慎小心并聽從任課老師或助教之指導。
革蘭氏染色步驟中酒精脫色部分因對實驗結果有重大影響，故實驗進行時應特別注意。
每項染色步驟中，染劑用量需控制得當不宜過少，且應注意勿使染劑乾枯，當使用蒸餾水沖洗多馀染色液體后，應將殘留在玻片上之水滴吸去，再進行下一染色步驟。
革蘭氏染色不宜使用培養超過24小時之細菌進行染色觀察，以免影響最終之判定結果。
實驗結果
請畫出以革蘭氏染色法染色后之菌體，并以不同顏色來辨別革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌。
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